超小型Cas12f1通过腺相关病毒传递实现高效的CRISPR编辑

韩国科学技术院Yong-Sam Kim团队利用超小型Cas12f1和经设计的引导RNA通过腺相关病毒传递实现高效的CRISPR编辑。相关论文于2021年9月2日在线发表于国际学术期刊《自然—生物技术》。

研究人员重新设计了Un1Cas12f1的天然引导RNA的五个部位：反式激活CRISPR RNA（tracrRNA）的5′末端、tracrRNA-crRNA互补区、一个五（尿苷酸）序列、crRNA的3′末端和tracrRNA中一个无序的茎2区。这些优化措施协同地使平均的插入缺失频率增加了867倍。优化后的Un1Cas12f1系统在通过质粒载体、PCR扩增子和腺相关病毒（AAV）传递时，能够在人类细胞中进行高效、特异的基因组编辑。由于Un1Cas12f1在原生质粒之外进行切割，它可以被用来有效地创建大的缺失。工程化的Un1Cas12f1系统显示出与SpCas9相当的效率和与AsCas12a相似的特异性。

据了解，基因治疗将受益于一个微型的CRISPR系统，它适合于小型AAV的基因组，并且在真核细胞中具有高切割活性和特异性。目前发现的最紧凑的CRISPR相关核酸酶之一是古细菌Un1Cas12f1。 然而，Un1Cas12f1及其变体在真核细胞中的活性非常低。