BRAF是一种RAF激酶，它是RAS/RAF/MEK/ERK信号级联的核心成分，被称为丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路。它也是癌因子RAS的主要影响因子之一，经常在人类癌细胞中发生突变。两种FDA批准的药物达拉菲尼（Dabrafenib）和维洛菲尼（Vemurafenib）能有效地抑制最常见的BRAF变体V600E，一种单体的BRAF，但是其他非V600E的BRAF突变对这两种药物都存在本质上的耐药性。而且当肿瘤细胞含有野生型BRAF和RAS的时候，这些药物可能会刺激通路，从而引起继发性恶性肿瘤。研究人员试图去探索二聚体BRAF，例如野生型和G469A。G469A是一种常见于肺癌细胞的非V600E变异，连接在二聚体表面（DIF），它具有20aa的长度位于BRAFalpha-C螺旋的末端。研究人员利用计算机模型设计了Braftide来阻止二聚作用，他们在体外对HEK263细胞和结肠癌细胞系进行了功能测试。LifeTein-泽溪源生物合成了Braftide(TRHVNILLFM),Null-Braftide(THHVNILLFM),Cy3-Braftide(TRHVNILLFM-Cy3),TAT-Braftide(GRKKRRQRRRPQ-PEG-TRHVNILLFM),和TAT (GRKKRRQRRRPQ)，在此我们回顾了一些有助于支持Braftide作为BRAF二聚体变构抑制剂和MAPK信号通路下调因子用于癌症治疗的实验。
1.无细胞体外试验：量效关系。首先，研究人员表明Braftide对二聚体BRAF有一个亚微级别的IC50，全长的二聚体BRAF-WT和BRAF-G469A（来自HEK293F细胞）被用来做量效关系研究，用pMEK来测定BRAF的活性。2.无细胞体外试验：饱和结合试验。研究人员用Cy3标记的Braftide（Cy3-Braftide）来荧光定量分析来分析Braftide与二聚体BRAF-WT的结合。3.无细胞体外试验：免疫沉淀（IP）。IP的目的是为了显示Braftide能扰乱BRAF的二聚作用。将Braftide加到HEK293细胞裂解液中共同表达V5-和FLAG-标记的BRAF-WT，FLAG-标记的BRAF被FLAG抗体偶联树脂留下，使得V5-标记的BRAF能进一步被检测，Braftide确实降低了同二聚体BRAF。4.将Braftide导入HEK细胞抑制BRAF。将Braftide用细胞穿透肽TAT进行标记，用TAT-Braftide（及其阴性对照TAT）处理瞬时转染BRAF-WT和BRAF-G469A的HEK293细胞。4小时的处理会导致BRAF，pMEK，MEK（即MAPK通路）的减少，并用相应的抗体进行免疫印迹分析。5.将Braftide导入癌细胞抑制BRAF和细胞增殖。用细胞穿透肽TAT-Braftide处理两株结肠癌细胞株（KRAS-G13D-coloncarcinoma），进行BRAF活性抑制，MAPK信号下调和细胞增殖的检测，结果均成阳性，而阴性对照TAT则是阴性。
Braftide，一种可用于癌症治疗的高效BRAF二聚体变构抑制剂 |
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