细胞培养时一直长不好？

lymm · 发表于 2019-5-8 15:06

疟原虫培养时，虫一直长不起来，无法知道是不是污染的原因，从显微镜下图片能看出来吗？细胞有没有被污染，图片附下

细胞培养时一直长不好？

善良的花朵 · 发表于 2019-5-9 09:20

　　疟原虫培养比较复杂，需要“O”型人红细胞、人血清及由3%氧气、4%二氧化碳和93%氮气组成的气体充在培养瓶内。当然还需要基本的培养液例如RPMI1640等，而且必须每天更换。整个培养系统也必须是无菌状态的。这里例举一种培养方法：取新鲜“O”型抗凝全血，离心使血清与红细胞分离开来。

　　血清按一次需要量分装于小容量的无菌瓶或试管中，-20℃保存。红细胞以RPMI1640洗涤三次后，悬浮在等量的含10%人血清的RPMI1640中，4℃保存，可使用2～3周。市售的RPMI1640液体培养液或粉末培养基溶解过滤灭菌后，加入HEPES和谷胱苷肽，使最终浓度分别为25mmol和0.6%，成为完全的RPMI1640的培养液。

　　培养时取病人血，以RPMI1640洗涤2次，再加入含15%人血清的完全RPMI1640培养液，使再成为含量约为0.2%～0.4%的悬液。取悬液8ml置35cm2（70ml）无菌细胞培养瓶中，再加入红细胞悬液，使其最终成为3%～5%红细胞悬液，充入上述混合气体，紧盖瓶盖，37℃培养箱中培养。一般24小时更换培养液一次。换液时尽量不晃动细胞层，不触及红细胞，以消毒吸管除去老培养液。加入等量新鲜的含15%人血清的完全RPMI1640培养液后再轻轻悬浮细胞，37℃继续培养。同时定时吸取少量沉淀细胞涂成簿血片，姬氏染色，了解虫体生长情况。红细胞外期的培养恶性疟原虫和间日疟原虫可以成功。

lymm · 发表于 2019-11-1 17:54

谢谢您，一直是按上述操作进行的，现在复苏后直接长不起来，隔天换液到裂殖体期就不往下发育了，而且裂殖体好像是散的那种，状态也不好，现在怀疑是哪里不对，但是找不到到底是哪里出问题

lymm · 发表于 2019-11-1 17:55

善良的花朵发表于 2019-5-9 09:20
　　疟原虫培养比较复杂，需要“O”型人红细胞、人血清及由3%氧气、4%二氧化碳和93%氮气组成的气体充在培养 ...

谢谢您，一直是按上述操作进行的，现在复苏后直接长不起来，隔天换液到裂殖体期就不往下发育了，而且裂殖体好像是散的那种，状态也不好，现在怀疑是哪里不对，但是找不到到底是哪里出问题

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晓木虫

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