激光共聚焦实验的样品准备方法对比

1.盖玻片需用浓硫酸浸泡过夜，第二天用自来水冲洗20遍，置于无水乙醇中6小时，后用三蒸水冲洗3遍，再放在饭盒或玻璃培养皿中烘干，消毒，再烘干后放入超净台备用。

2.准备好的盖玻片或者专业的细胞爬片需要根据细胞的贴壁情况使用多聚赖氨酸等蛋白包被。

3.培养板中放置爬片非常有技巧，要将爬片与培养板底部紧密贴合，这样才能避免长成双层细胞。

4.常规免疫荧光操作后，取出爬片。准备载玻片一张，在中间滴加适量的封片剂（甘油配置），将盖玻片或爬片翻过来，盖在封片剂上，再用指甲油封片进行成像。

5.在激光共聚焦成像之前，最好用荧光显微镜检查一下细胞状态和成像效果，再去做激光共聚焦，毕竟做一次激光共聚焦的成像也不便宜的。

1.在超净台中打开共聚焦专用培养皿的灭菌包装，拿出培养皿，加入细胞悬液，盖上皿盖，放入培养箱中静置，等待细胞贴壁。常规细胞培养，待细胞长置合适密度再取出，进行免疫荧光染色。

2.吸出培养基，以PBS清洗细胞，再用2%的多聚甲醛PBS溶液固定细胞。

3.20分钟后，吸出固定液，加入0.1%Triton X-100

4.10分钟后，吸出Triton，清洗细胞后加入BSA封闭。

5.加入抗体荧光染色后，吸出所有试剂，加入封片剂，可以开始共聚焦显微成像。