本人在做毕业设计,课题为微波处理对跨荞麦种子萌发及酶活性影响。现阶段用愈创木酚法测定过氧化物酶(POD)出现了问题,希望各位指教一下。 首先简单的介绍一下我的处理过程:取0.3克荞麦种子,用含有0.1mmol/lEDTA,4%PVP的PH7.8,0.05mol/l磷酸缓冲溶液(PBS),配以适量石英砂研磨,后经10000r/min,离心15分钟,的酶初提液。
测定过程:
4ml反应液(PH6.0,0.05mmol/lPBS,酶液1 ml,0.05mol/l愈创木酚) + 2%H2O2 1ml 混匀后立即于比色皿,测470nm处吸光度,每三十秒记录一次,记录4min,以缓冲溶液代替酶液作对照,以每分钟A470nm吸光度变化0.01为一个酶活单位。
疑问:但我测定4min内,每个样品吸光度变化不超过0.003,请问何处存在问题?如何改进为好?在下拜谢!!!
求助帖,关于POD活性测定,请大神指教,小生拜谢 |