晓木虫首页学术数据库客户端
开启辅助访问 设为首页赞助得金币注册指南网站导航

 找回密码
 注册账号

QQ登录

微信登录

实验动物的灌注固定原理和技巧

摘要: 灌注固定主要用于神经系统，其他组织意义不是很大，而且耗时耗力。对神经系统防止变性效果较好！小鼠灌注：灌流固定小鼠时我一般采用输液器的针头(4号半，这样肉眼可 ...
灌注固定主要用于神经系统，其他组织意义不是很大，而且耗时耗力。对神经系统防止变性效果较好！
小鼠灌注：

灌流固定小鼠时我一般采用输液器的针头(4号半，这样肉眼可见就是肺部明显充气胀大变白，针头要从心轴方向进针，刺入心尖3~4毫米左右就可以了，开始灌流后剪破右心耳，约40毫升生理盐水，后再灌流约20毫升多聚甲醛，整个灌流固定的过程就完成了。

大鼠灌注：

    按大鼠体重，用2%戊巴比妥钠（0.25ml/100g）进行腹腔注射麻醉，开胸暴露心脏，向左心室内注射1%肝素钠0.2ml后经左心室行主动脉插管， 血管钳固定后剪开右心耳，先以生理盐水150ml快速冲洗血管，然后用4%多聚甲醛的0.01mol/LPBS（4℃，PH7.40）250ml灌注固 定，先快后慢，共需时间为50min，之后取材，置4%多聚甲醛固定液后固定，在4℃冰箱内保存。多聚甲醛进入大鼠体内，大鼠会出现四肢、尾的抽搐，最终 以肝脏发白、内脏鼓起即灌注好。

脑组织免疫组化实验

    1. 灌注固定用的针头，一般都用注射针头。灌注大鼠一般可用10到12号针头，小鼠可用6、7号针头，但很重要的一点是要把针头的尖端磨钝而不是用锐利的针头。（对不起老板了，把我们的秘密都外传了）。

   2. 关于穿刺：灌注大鼠时要把穿刺针的尖端插入到升主动脉内，但不宜进入升主动脉过长，在动脉内见到针头或插入约1mm左右即可；灌注小鼠时只要把针头插入左心室内即可，不必要插入到升主动脉内。操作的要点是：第一，操作要迅速，剪开膈肌后，迅速沿腋前线剪开胸壁，并把胸前壁往上翻，暴露心脏；第二，一定要在明视野下操作，要剪开心包壁层的前壁，暴露升主动脉和肺动脉干的根部，确保穿剌针能进入升主动脉；第三，穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定心脏，但不要夹得过紧，要让心腔内留有一定的间隙，然后在心尖处轻轻旋转针头插入穿刺针。也可以用小剪刀在心尖处先剪开一个小口再插入穿刺针；第四，穿刺方向要正确，从心尖部开始，从左下方斜向右上方，若遇阻力要改变方向再试，不要用力蛮插。

   3. 灌注用生理盐水的量大鼠用50ml左右，小鼠用10ml左右，一般以从右心耳流出的液体清亮为标准；4%多聚甲醛用量约相当于老鼠体重，如300克的老鼠用300ml左右。小鼠一般用20-30ml。灌注速度先快后慢，可持续1-2个钟头，也可以稍快。取脑后置脑块于4%多聚甲醛内4度后固定4-6个钟头。

整体实验外包
动物实验外包
实验外包

难点与关键点：

     将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用眼科镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度最 好为3~5毫米，然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内，这样由于主动脉瓣的关闭，灌注液很难进入主动脉，而是沿着心室的切口流出，致使灌注失败。另 外，灌注针插入成功后，一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室，这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注针插入右心室。

注意事项：

1. 针头大小与动物的种类有关，t同时针头一定要磨钝。

2. 检查灌注泵的运作情况，一定排出管子的气泡和空气，防止空气栓塞

3. 经腹腔暴露胸腔，先清楚升主动脉外面的脂肪组织和心外膜组织

4. 将针头经左心室插入升主动脉（颜色变白的哦），并用钳子固定

5. 解开右心耳，同时开启灌注泵。注意，不要随便揭开心脏的其他部位，否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功，尤其肺水肿。

6. 将4度的生理盐水（最好已动物的肝脏发白为标准，我们实验室的大鼠约用250ml）和多聚甲醛(根据所取得材料而定)依次灌入

7. 整个过程均应将动物放在冰上，以便于最大程度的保存目的蛋白和酶的活性




实验动物的灌注固定原理和技巧
评论

举报

谢谢您的分享！
评论 支持 反对

举报

大家都不容易！
评论 支持 反对

举报

论坛有你更精彩！
评论 支持 反对

举报

好东西一定要看看！
评论 支持 反对

举报

大家都不容易！
评论 支持 反对

举报

论坛有你更精彩！
评论 支持 反对

举报

论坛有你更精彩！
评论 支持 反对

举报

以后多分享一些这样的有价值的帖子啊
评论 支持 反对

举报

返回顶部