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慢病毒RNAi干扰

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晓木虫»生物与医学»慢病毒RNAi干扰
[生物与医学]

慢病毒RNAi干扰

中洪博元 发表于 2016-7-28 16:30  
查看: 100913|回复: 7|
       深圳中洪博元生物技术有限公司   因为专注,所以专业 。
(一)原理

慢病毒是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构,但也有不同于逆转录病毒的组份和特性,作为基因治疗载体发展起来,最近已用于转基因动物制备。利用慢病毒构建的shRNA/miRNA载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,lentivirus-shRNA/miRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。

(二)服务流程

(1) 含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和纯化提取;
(2) 慢病毒干扰载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞;
(3) 培养48~72h,收集培养上清;
(4) 病毒的纯化和浓缩(超离和/或超滤);
(5) 滴度测定、目的基因检定
(6) 将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞,筛选混合稳定细胞株,并检测靶基因的表达。

客户提供
(1)表达miRNA/shRNA的质粒(提供测序图谱)或所要Knockdown的靶基因的名称、序列;
(2)所需要的病毒滴度及总量,病毒是否需要纯化
(3)若需要检测靶基因的表达变化,如需要请提供相应的抗体

我们提供
(1)提供重组后的慢病毒载体质粒
(2)提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的慢病毒储存液

深圳中洪博元生物技术有限公司   因为专注,所以专业 。

慢病毒RNAi干扰

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丹丹aimuchong 发表于 2016-9-29 00:09  
谢谢您的分享!
20068851 发表于 2016-9-29 06:53  
以后多分享一些这样的有价值的帖子啊
FenGShao24 发表于 2016-9-29 09:49  
大家都不容易!
王军礼晓木虫个人认证 发表于 2016-9-29 14:19  
论坛有你更精彩!
常佳乐 发表于 2016-9-29 14:24  
好东西一定要看看!
lj5353553 发表于 2016-9-29 19:37  
大家都不容易!
kangmaj 发表于 2016-9-29 20:53  
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