医学实验/引物设计经验总结

中洪博元 · 发表于 2016-7-25 14:46

本帖最后由一只虫子于 2016-7-27 09:36 编辑

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引物序列的特异性是决定PCR特异性扩增的主要因素。现在我们常用引物设计软件来进行引物设计，但如注意到以下条件将会事半而功倍：

1）  引物长度在15～30 bp为佳，过长的引物与模板复性杂交速率减慢，降低扩增效率，过短则会降低特异性。

2）  引物内部不应形成二级结构，两引物之间不能互补。

3）  碱基应随机分布，（G+C）%最佳含量在45%～55%，应避免4个以上的相同碱基排列。

4）  引物3’端和模板的碱基最好完全配对，而引物3’端最后5～6个核苷酸与模板的错配应尽可能少。

5）  引物3’端碱基最好是T、G、C而不是A，这样会有利于延伸。

6）  可在引物5’端添加不与模板互补的额外序列以便于后续分析。

医学实验/引物设计经验总结

xiaojuan · 发表于 2016-9-28 22:45

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zhaoliteng · 发表于 2016-9-29 02:02

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昆虫记 · 发表于 2016-9-29 08:50

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THINKER · 发表于 2016-9-29 14:51

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scw2007imu · 发表于 2016-9-29 15:08

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王军礼 · 发表于 2016-9-29 15:21

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寂静的夜 · 发表于 2016-9-29 15:46

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若绾君 · 发表于 2016-9-29 16:36

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xiaomuchongfei · 发表于 2016-9-29 21:11

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hxk06102558 · 发表于 2016-9-30 01:30

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woainidandan · 发表于 2016-9-30 10:09

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陆仁炳 · 发表于 2016-9-30 10:21

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gongjiji · 发表于 2016-9-30 10:45

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1315194166 · 发表于 2016-9-30 10:57

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欢乐谷 · 发表于 2016-9-30 14:15

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dengmxgz · 发表于 2016-9-30 15:15

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