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PCR产物双酶切

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晓木虫»生物综合»PCR产物双酶切
[生物综合]

PCR产物双酶切

 楼主| 善良的花朵 发表于 2022-3-21 14:15  
查看: 68215|回复: 0|
PCR产物可以直接用来做双酶切吗?PCR产物做双酶切有的片段很好切,有的片段很难切,这主要和PCR片段的二级结构有关。如果双酶切很难切,就把整个片段分部分片段扩增后,用单酶切。如果酶切位点在PCR产物的两端,PCR产物酶切后很难判断是否切开,以至影响下一步的连接转化,如果一次成功没的说,如果多次失败,建议先回收加A连T载体转化,再提质粒作酶切,再连你的质粒,步步为营。
也就是说,在对PCR产物进行双酶切时,需要对PCR产物先进行纯化,PCR体系的离子会干扰酶切反应。一般就是PCR产物回收试剂盒回收下。 双酶切还是单酶切看两个酶的反应Buffer是不是一致,一致就可以双酶切了,30ul体系,酶1ul(大约10u),质粒一定要纯化,不然不能完全酶切,转化出来都是原来的载体。PCR产物双酶切
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