PCR产物可以直接用来做双酶切吗？PCR产物做双酶切有的片段很好切，有的片段很难切，这主要和PCR片段的二级结构有关。如果双酶切很难切，就把整个片段分部分片段扩增后，用单酶切。如果酶切位点在PCR产物的两端，PCR产物酶切后很难判断是否切开，以至影响下一步的连接转化，如果一次成功没的说,如果多次失败,建议先回收加A连T载体转化，再提质粒作酶切，再连你的质粒，步步为营。
也就是说，在对PCR产物进行双酶切时，需要对PCR产物先进行纯化，PCR体系的离子会干扰酶切反应。一般就是PCR产物回收试剂盒回收下。 双酶切还是单酶切看两个酶的反应Buffer是不是一致，一致就可以双酶切了，30ul体系，酶1ul（大约10u），质粒一定要纯化，不然不能完全酶切，转化出来都是原来的载体。PCR产物双酶切 |
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